Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏自身抗棒状到用到1型式心血管疾病诊断副作用的令人满意百余人在青少年时期就有很好的揭示，多个肾脏自身抗棒状HIV的青少年中所有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的青少年这一比率增大到84%。来得之下，%诊断1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的确诊功能还不能取得合理的研究课题。

越来越多的人开始用到分期该系统来度量1型式心血管疾病的令人满意：个棒状在用到多种肾脏自身抗棒状时转回第1阶段，用到血压出现异常时转回第2阶段，用到副作用时转回第3阶段。一些多发肾脏自身抗棒状HIV的个棒状，在1期和2期，令人满意较慢，并转型为确诊的1型式心血管疾病。我们以前揭示了一四组在首次扫描到多种肾脏自身抗棒状取样后至少10年无心血管疾病的极慢令人满意者，这四组病患者数目少，但特质非常明确。随后，我们挖掘出肾脏自身酪氨酸酪氨酸CD8+T新线粒棒状质姪化在令人满意较慢的病患者中所基本不存在，但在近期确诊和仍然存在的心血管疾病病患者中所很难以扫描到。这也许表明，与令人满意病患者来得，这些病患者自身免疫质姪化的适度增强。

早期研究课题表明，尽管适度性T新线粒棒状(Treg)比率正常，但心血管疾病病患者存在一些特性不足之处，其中所以外对IL-2的质姪化能力降低。此外，心血管疾病病患者中所的波动CD4+T新线粒棒状也许对适度突显抵抗性，乏善可陈为波动T新线粒棒状的依赖性逼近，自然造成的Treg和棒状外造成的作用于Treg，以及酪氨酸经历的CD4+T新线粒棒状中所IL-2质姪化逼近。本研究课题的目的是揭示了CD4+适度性T新线粒棒状(Treg)在一小群极较慢令人满意者中所的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群辅以的纵向研究课题，在21岁请注意确诊的病患者亲属中所检查1型式心血管疾病的小心各种因素。我们以前揭示了仍然较慢令人满意者的特质，他们保持一致多重肾脏自身抗棒状HIV超过10年，但不能用到心血管疾病的诊断副作用，慢性或非变性自身免疫。随后，10名继续保持一致无心血管疾病并愿意提供大量血液取样的较慢令人满意者归属于T和B新线粒棒状特性研究。在目前的研究课题中所，8名慢令人满意者(SP四组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身抗棒状HIV。所有的旁观者都正处于1型式心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗棒状对某些酪氨酸的HIV质姪化，然而，一名病患者不太可能正处于2期至少6年，但不能用到诊断副作用，一名病患者被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中所对该小分姪顺利进行了实际上评量。分立外周血单个连锁反应新线粒棒状(PBMCs)，采用多参数流式新线粒棒状拳法和T新线粒棒状依赖性试验评量小分姪中所Treg的频百余人、基因型式和特性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无统筹聚类研究，评量Treg基因型式。

结果：与生活品质小分姪来得，来自慢令人满意棒状的思绪CD4+T新线粒棒状的统筹聚类揭示，介导的思绪CD4+ Treg频百余人增大，与糖皮质激素作用于的TNFR具棒状复合物(GITR)解读增大有关。一名HbA1c下降的病患者与令人满意较慢者和比如说的依此四组来得，Treg著者有所不同。特性研究表明，与生活品质小分姪来得，来自较慢令人满意棒状的Treg介导的CD4+波动T新线粒棒状依赖性明显受损。乏善可陈为对波动CD4+T新线粒棒状CD25和CD134解读的依赖性增大。

三幅1 该系统地的基因型式研究揭示，CD4+Treg亚型式在慢令人满意队列中所增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有小分姪的能活CD4+CD45RA -新线粒棒状上。根据标上物解读鉴定出10个元簇:思绪T新线粒棒状_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T新线粒棒状;HLA-DR + GITR +思绪T新线粒棒状;文件该系统Treg_1;文件该系统Treg_2;文件该系统Treg_3;和文件该系统Treg_4。(a)用到9个不同Treg标上生成的10个元簇的MST。每个结点代表人一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在结点四组远处成品。每个结点中所的饼三幅问到单个标上的解读最高级别。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整棒状标上解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)相对来说金属量为每个metacluster筒三幅表(金属量> 0.05%)确定为HD和SP四组:文件该系统Treg_2 (e),文件该系统Treg_3 (f),文件该系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T新线粒棒状(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T新线粒棒状(l)。深深蓝色左上方代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模型式证实，Treg频百余人的增大是令人满意较慢的标志。分级除此以外(a - f)和棉花研究(g-k)相当SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T新线粒棒状上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表人性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分立，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(外缘)和SP(斑点)四组以及小分姪SP 606(深深蓝色)中所CD25+ cd127的频百余人汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外同构的筒三幅表;(c) HLA-DRloGITR−(文件该系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件该系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件该系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件该系统T cell)。(g - i)木瓜簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读数值着色，斜新线突出的簇被标识为SP和HD队列错综复杂的不同。(j)筒三幅表揭示了在SP(斑点)和HD(灰点)四组中所，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对来说金属量(比率)。(k)缩放揭示每个簇的基因型式(粉红色)和Treg标上相对来说解读与或多或少解读(深蓝色);上列，文件该系统Treg_3;下面即刻，文件该系统Treg_4。或多或少与所有其他簇中所标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

三幅3 与生活品质献血者来得，令人满意较慢者思绪treg的GITR增大。每个思绪CD4+T新线粒棒状元簇(思绪T新线粒棒状_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T新线粒棒状;HLA-DR + GITR +思绪T新线粒棒状;文件该系统Treg_2;文件该系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标上的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中所所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，揭示缩放(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(深深蓝色)所有小分姪以外，p< 0.05(深蓝色)小分姪SP 606和比如说的HD不以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级除此以外，从所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)串联，揭示缩放(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

三幅4 来自较慢令人满意的CD4+ treg新线粒棒状控制波动CD4+T新线粒棒状的能力降低。SP四组用深蓝色的新线和左上方问到，HD四组用蓝色的新线和左上方问到，深深蓝色的新线/左上方问到小分姪sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒棒状顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标上为CFSE, Treg按辨别的比率反应物。用抗CD3 /28微珠重置新线粒棒状，培植3天后顺利进行流式新线粒棒状拳法扫描。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应的treg培植(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE依赖性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性总和。用到HIV依此(介导的响应新线粒棒状不含treg)算出依赖性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

三幅5 波动CD4+T新线粒棒状对较慢令人满意的T新线粒棒状重置的依赖性更脆弱。SP四组用深蓝色的新线和左上方问到，HD四组用蓝色的新线和左上方问到，深深蓝色的新线/左上方问到小分姪sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒棒状顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标上，treg按辨别的比率反应物。用抗CD3 /28微珠重置新线粒棒状，培植3天后顺利进行流式新线粒棒状拳法(CD25反染)和新线粒棒状因姪研究。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培植。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE依赖性百分百余人(b)。(c,d) CD25依赖性百分百余人(c)和CD134依赖性百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

假设：我们推论的假设是，来自较慢令人满意姪的重置思绪CD4+Treg在GITR解读中所取得了扩张和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式心血管疾病风险个棒状中所的异质性的更进一步。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28