Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身HIV到注意到1M-心血管疾病临床症状的十分困难率在儿童末期就有很好的描述，多个家兔自身HIV中性的儿童之中有70%在HIV转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一%-下降到84%。即便如此，%临床1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的肺癌程序还从未给予充分的研究工作。

日益多的人开始适用分期系统来定义1M-心血管疾病的十分困难：母体在注意到多种家兔自身HIV时进到第1阶段，注意到摄入量异常时进到第2阶段，注意到症状时进到第3阶段。一些多发家兔自身HIV中性的母体，在1期和2期，十分困难更相比较之下慢，并其发展为肺癌的1M-心血管疾病。我们之前描述了一第一组在首次测定到多种家兔自身HIV样本后至不算10年无心血管疾病的近于相比较之下慢十分困难者，这第一组病变人数不算，但基本特征非常明确。随后，我们发现家兔自身抗体抗体CD8+T巨噬细胞自由基在十分困难缓相比较之下慢的病变之中基本不不存在，但在近期肺癌和长年不存在的心血管疾病病变之中很容易测定到。这不太可能表明，与十分困难病变相比较，这些病变自身免疫自由基的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但心血管疾病病变不存在一些功能缺陷，其之中有数对IL-2的自由基能力下降。此外，心血管疾病病变之中的物理现象CD4+T巨噬细胞不太可能对调节更具抵抗性，体现为物理现象T巨噬细胞的消除弱化，自然显现出的Treg和肾脏显现出的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T巨噬细胞之中IL-2自由基弱化。本研究工作的借以是描述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在海岸边近于缓相比较之下慢十分困难者之中的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病变亲属之中检查1M-心血管疾病的危险环境因素。我们之前描述了长年缓相比较之下慢十分困难者的基本特征，他们保证多重家兔自身HIV中性最少10年，但从未注意到心血管疾病的临床症状，相比较之下慢性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保证无心血管疾病并希望获取大量血液样本的缓相比较之下慢十分困难者归属于T和B巨噬细胞功能分析。在迄今为止的研究工作之中，8名相比较之下慢十分困难者(SP第一组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身HIV中性。所有的行动者都处于1M-心血管疾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身HIV对某些抗体的中性自由基，然而，一名病变已经处于2期至不算6年，但从未注意到临床症状，一名病变被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在科研人员之中对该NADP完成了分开审计。分开外周血单个核反应巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞消除试验审计NADP之中Treg的频率、表M-和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和转回)完成无监督聚类分析，审计Treg表M-。

结果：与有益NADP相比较，来自相比较之下慢十分困难体的无意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类揭示，激能活的无意识CD4+ Treg频率下降，与持续性诱导的TNFR相关酶(GITR)暗示下降有关。一名HbA1c升高的病变与十分困难缓相比较之下慢者和反之亦然的对应第一组相比较，Treg谱有所相同。功能于数，与有益NADP相比较，来自缓相比较之下慢十分困难体的Treg酪氨酸的CD4+物理现象T巨噬细胞消除值得注意受到破坏。体现为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134暗示的消除下降。

所示1 有系统的表M-分析揭示，CD4+Treg亚M-在相比较之下慢十分困难配置文件之中下降。由FlowSOM聚合的Treg室，围住在来自所有NADP的能活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出物暗示鉴定出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个相同Treg标示出聚合的10个元簇的MST。每个终端均是由一个战略性(100个战略性)，相当大的元战略性(10个元战略性)在终端第一组四周手绘。每个终端之中的饼所示声称单个标示出的暗示档次。(b)每个元聚类的热所示，以揭示整体标示出暗示。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)聚合所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的表层。(e-l)相比较之下总质量为每个metacluster装相所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。绿色左上角均是由捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩核反应查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模M-声称，Treg频率的下降是十分困难缓相比较之下慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相比较之下SP行动者和反之亦然的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示完成分开，实时FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADPSP 606(绿色)之中CD25+ cd127的频率统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装相所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示低压着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD配置文件之间的相同。(j)装相所示揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组之中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比较之下总质量(%-)。(k)直方所示揭示每个簇的表M-(黄色)和Treg标示出相比较之下暗示与背景暗示(红色);上列，闪存Treg_3;下面几天后，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之中标示出的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩核反应查

所示3 与有益献血者相比较，十分困难缓相比较之下慢者无意识treg的GITR下降。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的暗示热所示(sp606不有数在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示联接，揭示直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon一对一符号秩和核反应查，p< 0.07(绿色)所有NADP有数，p< 0.05(红色)NADPSP 606和反之亦然的HD不有数在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)联接，揭示直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩核反应查

所示4 来自缓相比较之下慢十分困难的CD4+ treg巨噬细胞控制物理现象CD4+T巨噬细胞的能力下降。SP第一组用红色的中央线和左上角声称，HD第一组用灰色的中央线和左上角声称，绿色的中央线/左上角声称NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示出为CFSE, Treg按判读的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠能激活巨噬细胞，养成3当晚完成流式巨噬细胞奥义测定。(a-d)与CD4+反之亦然者相比较之下应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。适用中性对应(激能活的响应巨噬细胞仅有treg)算出消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较之下测试

所示5 物理现象CD4+T巨噬细胞对缓相比较之下慢十分困难的T巨噬细胞能激活的消除更寻常。SP第一组用红色的中央线和左上角声称，HD第一组用灰色的中央线和左上角声称，绿色的中央线/左上角声称NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示出，treg按判读的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠能激活巨噬细胞，养成3当晚完成流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬炎症分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成之中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较之下测试

假设：我们证明了的假设是，来自缓相比较之下慢十分困难子的能激活无意识CD4+Treg在GITR暗示之中给予了扩展和相比较之下丰富，阐释了进一步研究工作Treg在1M-心血管疾病可能会母体之中的异质性的有效性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28